Alba STED 超分辨多维共焦成像系统

Alba STED 超分辨多维共焦成像系统

添加时间:2017-05-08 09:57:00

细胞生物学单细胞监测的最佳设备


受激发射损耗(STED)是一个非常强大的显微镜技术,可以观察衍射极限以下的空间分辨率的荧光结构。设备 Alba-STED使用了脉冲激发和脉冲损耗的方法(pSTED)结合数字频域荧光寿命成像技术记录了时间分辨光子,提高了同样激发波长下的双标记的成像分辨率及区分度


FLIM/FFS的Alba-STED主要特点: 


  • pSTED (脉冲激发和脉冲损耗 STED)

  • 数字频域FastFLIM下的时间分辨的pSTED信号采集

  • 相量图法下的高成像分辨率

  • 双标激发

  • 快速成像的数据采集 (5 frames/second at 256x256 pixels)

  • 高动态范围 (信号最大 13 million counts/s)


FLIM/FFS的Alba-STED主要参数:

设备特点
  • 每一个采集通道都有一个针孔结构

  • 计算机控制的真空孔径光阑

  • 计算机控制的针孔在像平面的位置

  • 单光子或多光子激发

  • 最多4通道数据采集

  • 相机接口

采集分析软件
  • ISS 的VistaVision

STED 激光
  • 脉冲式的, 775 nm, 功率: 1 W

  • 脉冲宽度: 大约 600 ps

  • 重复率: 0-100 MHz; or Ext. CLK

  • 束流质量: M2 < 1.1, TEM00

  • 振幅噪声: < 4.0% rms

激发激光
  • 脉冲式, 640 nm,脉冲宽度 (中功率): 40-90 ps

  • 重复率: 20, 50, 80 MHz; 或 Ext. CLK

  • 功率 (at 50 MHz): 最大 5 mW

激光器
  • 3, 4, 6模激光二极管. 光通过单模光纤显微镜

FastFLIM
  • 4个独立的输入信号

  • 动态范围: 最大 13 million counts/s 每通道

  • 寿命范围: 从 皮秒到秒

显微镜
  • 正置或倒置

物镜
  • 外部物镜 放大倍率20X, 40X, 60X,工作距离1.5-8.1

  • 油浸物镜, 1.4 NA  60X (标准); 其它物镜选配

  • 水浸物镜,1.2 NA  60X (标准), 盖玻片校正(用于0.15-0.18盖玻片); 其它物镜可选

样品台
  • 大移动范围 (100x100x10 mm)

  • 马达控制步进 XYZ 样品台

  • 微距移动

  • XYZ 压电控制样品台, 100x100x50 µm , 5 nm 分辨率步进.

样品托
  • 微孔板包

  • 培养皿

  • 盖玻片

光探测器
  • APD

  • GaAs PMT

成像采集
  • FLIM 采集: 5 frames/sec (256 x 256 pixels)

操作系统要求
  • Windows 10, 64-bit

电源要求
  • 通常的电源输入: 110-240 V, 50/60 Hz, 400 VAC

尺寸
  • 885 mm (L) x 600 mm (W) x 330 mm (H)

重量
  • 40 kg


FLIM/FFS的Alba-STED功能:


FFS 功能

  • 荧光相关光谱 (single- and cross-correlation)

  • 光子计数直方图(PCH)

  • 在一个图像中实现XYZ三维的 FFS测量

  • FLCS,荧光寿命相关光谱

  • 扫描FCS

  • 强度与计数 (N&B)

  • 光栅成像相关光谱 (RICS)

单点模式测量

  • 强度

  • 偏振

  • 动力学

  • 寿命

成像模式测量 (单面和z-切片)

  • 强度

  • 偏振

  • 比率计

  • 荧光寿命

FLIM 成像 (数字频域) (单面和z-切片)

  • 采用数字频域技术(DFD). 可同时获得寿命成像和稳态荧光成像

FLIM 成像 时域单面和z-切片)

  • 采用时间相关单光子计数(TCSPC) 技术

超分辨

  • 粒子追踪

  • 纳米成像

单分子模式

  • 淬灭分析

  • 荧光共振能量转移FRET 和 相关方法

  • PIE-FRET 方法


FLIM/FFS的Alba-STED的框架图:



FLIM/FFS的Alba-STED的应用案例:


Confocal (green) vs. pSTED (red) images of 60-nm fluorescent beads, acquired by FastFLIM

Confocal (left) vs. pSTED (right) images of the actin labeled with the SiR dye in fixed glia cells, acquired by FastFLIM.

Confocal images of 60nm fluorescence beads (left); pSTED images (middle); sharpening the pSTED image using a binary filter based on the phasor plots (right).

Dual labels can be separated using pSTED and FastFLIM. Atto 647N and Atto 655 were used as labels; they both are excited by the 640 nm laser. The two dyes are first separated using the phasor plots, and then assigned with two different false colors (Atto 647N - yellow, Atto 655 - purple) to produce the processed and merged pSTED image of the two labels.

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